真菌DNA/RNA提取 (磁珠法)
真菌,是自然界中广泛存在的微生物,在生态系统中占据一份很重要的地位。并且,真菌也是一种可以引发很多疾病的病原体,比如,白色念珠菌、隐球菌脑膜炎、毛霉菌等,所以,对于真菌的研究和检测具有比较重要的意义。 真菌DNA/RNA提取试剂是用于提取真菌细胞中的DNA/RNA,用于下游实验的分析和检测。而这种真菌核酸提取试剂的优点也很多,不论是操作,速度和效率,都是表现优良,同时,这种试剂也用途广泛,可以用于多类真菌的核酸提取,如酵母菌,食用菌,念珠菌,等可以应用于真菌的分子生物学研究、疾病诊断、药物研发等领域。
就以领骏生物有限公司产品为例:真菌DNA/RNA提取试剂。
这种试剂盒内包括裂解结合液,磁珠,异丙醇,洗涤液,还有洗脱液等试剂。
一、样本处理
杏鲍菇、香菇
二、裂解结合
在使用时,需要将真菌样本放置生理盐水中破碎,然后加入裂解结合液,使DNA/RNA从细胞中释放出来,然后离心取上清。
三、洗涤
使用领骏生物公司的洗涤液进行洗涤,这一步可提高基因组的纯度。不同样本可进行轻微调整。
四、洗脱
洗脱的步骤就是将吸附在磁珠表面的基因组DNA洗脱下来,并溶于洗脱液中,然后进行其他下游实验。
案例1:同一批次试剂提取不同新鲜真菌的实验结果:
样本 |
序号 |
A260/A280 |
A260/A230 |
Conc.(ng/μL) |
杏鲍菇菌褶20 mg |
1 |
2.192 |
1.541 |
349.95 |
2 |
2.187 |
1.501 |
310.1 |
|
3 |
2.191 |
1.527 |
320.25 |
|
平均值 |
2.19 |
1.523 |
326.7667 |
|
香菇菌褶 20 mg |
4 |
2.22 |
1.839 |
300.1 |
5 |
2.228 |
1.808 |
307.3 |
|
6 |
2.224 |
1.839 |
317.25 |
|
平均值 |
2.224 |
1.828667 |
308.2167 |
电泳图如下:
1-3杏鲍菇 4-6香菇
结果分析:试剂的提取效果很好(提取产物纯度好、浓度高、电泳条带完整)