上海领骏生物科技有限公司
服务热线:15821494616
联系我们
电话:18201879579
邮箱:lnjnbio@163.com
地址: 上海市青浦区北青公路10688弄3号401室、402室和5层
公司动态

如何较好的获得细菌基因组DNA/RNA

发表时间:2023-11-02

前段时间销售部门的同志又追加细菌基因组DNA/RNA提取试剂(磁珠法、预分装)的订单啦!询问客户需求后,实验室小组员们在马不停蹄开发优化验证新产品啦,接下来给大家分享一下实验成果。

一、实验目的

用自动核酸提取纯化仪能够成功提取细菌基因组DNA,并获得较好的电泳条带。

二、实验仪器及试剂

仪器:台式离心机(SIGMA)、超微量分光光度计(Q5000)、电泳仪(北京六一仪器厂,DYY-7C型)、自动核酸提取仪(LJbio32H)

试剂:细菌基因组DNA提取试剂盒(磁珠法、预分装)(货号:200866)

三、实验方法

1、样本处理:取过夜培养的细菌100~1000 μL(细胞数为108-109)至1.5 mL 离心管中10000g离心2min,吸弃上清,再加入200 μL EB重悬菌体备用。

2、按照试剂盒说明书手工操作,提取细菌基因组DNA。

3、优化自动核酸提取纯化仪的上机参数(①65℃裂解,8min ②65℃裂解,10min ③室温裂解,10min)。

4、用超微量分光光度计测量提取的DNA,并进行电泳检测。

四、实验结果

1、在超微量分光光度计上用EB润洗点点空白,取1-2 μl的洗脱产物检测,记录各个波长的吸光度,得到的数据如下:

表1  核酸提取纯化仪提取结果

序号

A260/A280

A260/A230

Conc(ng/μL)

备注

1.

1.98

1.51

186.6

658min4

2.

1.95

1.42

183.7

3.

1.92

1.39

163.3

6510min4

4.

2.02

1.69

150.1

5.

1.76

0.95

176.9

室温10min4

6.

1.89

1.24

380.6

备注:加底纹的电泳

2、 在1%的琼脂糖凝胶上加入6μL洗脱的基因组DNA/扩增产物/DNA Marker进行电泳,结果如下:


M:DL2000Ladder

1:65℃裂解,8min;2-3: 65℃裂解,10min;4-5: 常温10min

五、分析与讨论

1、由浓度测量结果和产物电泳图可知,三种提取条件下纯度与纯度稍有差异,室温裂解条件下,电泳结果点样孔有滞留,裂解效果比其他两种稍差,但也有明显DNA带与两条RNA条带。

2、电泳图编号4 的DNA条带略暗,与测量结果也能对应起来,分析原因是提取所用耗材此孔位对应的磁棒套稍长一点,仪器提取过程中磁棒套搅拌过程中影响其裂解效果,导致此孔提取核酸测量值与电泳结果稍差。

3、对比三种程序提取效果,65℃裂解8min的测量值较均一,重复性较好,DNA条带最亮。

上海领骏生物科技有限公司成立于2016年,位于上海市青浦区张江云立方园区。公司长期致力于生物领域内相关产品的研发、生产和销售,产品主要包括磁性纳米材料磁珠法核酸提取纯化试剂。公司一直坚持以质量、诚信、团结、奋进为宗旨,严格规范质量管理体系,持续创新、精益求精,为客户提供优质的产品和服务,被认定为国家级高新技术企业和上海市专精特新企业。


销售热线:15821494616 技术支持:18201879579

邮箱:lnjnbio@163.com

网址:http://www.lnjnbio.com/

上一篇:无 下一篇:动物组织DNA提取的方法和常见问题