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动物组织DNA提取的方法和常见问题

发表时间:2023-11-03

DNA提取是研究动物遗传信息和进行分子生物学实验的重要步骤之一。下面是一些常用的动物组织DNA提取方法和一些常见问题的解答。

 

方法一:酚/氯仿法

 

准备样品:选择合适的动物组织样品,如血液、肌肉或组织切片。将样品放入离心管中。

 

细胞破碎:加入细胞破碎缓冲液,使用离心机将样品离心,使细胞破碎释放DNA。

 

蛋白质沉淀:加入等体积的酚/氯仿混合液,轻轻摇晃离心管,使DNA分离到上层水相。

 

DNA沉淀:将上层水相转移到新的离心管中,加入等体积的异丙醇,轻轻摇晃离心管,使DNA沉淀。

 

洗涤和纯化:用70%乙醇洗涤DNA沉淀,然后用TE缓冲液溶解DNA。

 

方法二:磁珠法DNA提取试剂盒

样本处理:选择合适的动物组织样本,并按照试剂盒说明书的要求进行样本处理。通常需要将样本切割成小块或使用细胞破碎缓冲液将其破碎,以释放细胞内的DNA。

 

DNA结合:将样本加入试剂盒提供的管中,加入试剂盒提供的磁珠悬浮液,并充分混匀。磁珠会结合DNA分子,形成DNA-磁珠复合物。

 

磁珠分离:将管子放置在磁珠分离架上,使磁珠复合物沉降到管底。使用磁力架或磁力装置将磁珠吸附在管壁上,然后将上清液小心地倒掉。

 

洗涤:加入洗涤缓冲液,轻轻摇晃管子,使磁珠复合物充分悬浮。然后将管子放置在磁力架上,使磁珠复合物沉降到管底。倒掉上清液,并重复此步骤一至两次,以去除杂质。

 

DNA洗脱:加入洗脱缓冲液,轻轻摇晃管子,使磁珠复合物洗脱出DNA分子。将管子放置在磁力架上,使磁珠沉降到管底,然后将上清液转移到新的离心管中。

 

DNA沉淀:加入等体积的异丙醇,轻轻摇晃离心管,使DNA沉淀。通过离心分离DNA上层的水相,并丢弃上层液相。

 

洗涤和纯化:使用70%乙醇洗涤DNA沉淀,去除残留的盐和杂质。然后使用TE缓冲液(10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,pH 8.0)溶解DNA,以获得纯净且稳定的DNA样品。

 

检测DNA质量:使用分光光度计或凝胶电泳等方法检测提取到的DNA质量和浓度,确保其适用于后续实验分析

 

常见问题解答:

 

为什么我的DNA提取产量很低?

可能的原因包括样品质量不佳、细胞破碎不彻底、DNA结合效率低等。建议使用新鲜的样品、优化细胞破碎条件,并确保按照方法正确操作。

 

如何避免DNA污染?

DNA污染可能来自外源DNA,如细菌、真菌等。建议在提取过程中使用无菌操作,避免污染源接触样品。

 

如何保存提取的DNA?

提取的DNA应保存在-20°C或更低的温度下,避免长时间暴露在室温下。

 

是否可以直接使用提取的DNA进行PCR扩增?

通常情况下,提取的DNA可以直接用于PCR扩增。但如果提取的DNA含有抑制物质,可能需要进行进一步的纯化或稀释。